1、1.第一步，看箭头：大多数质粒都会有箭头，箭头有两种解释。

2、一种是转录方向，转录方向主要是由启动子开始的一个大箭头，是启动子启动序列的顺序。

3、另一种是复制起始位点的方向，复制起始位点就是该质粒在大肠杆菌等细菌或真菌中DNA复制的一个方向。

(资料图)

4、还需要提到的是F1启动子（图上的f1 ori）代表的是噬菌体的复制起始方向，只能复制出单链的DNA哦，但是可以用来测序。

5、看懂转录的方向，这样就方便设计插入片段的位置和方向性。

6、2.第二步，看上面的标签。

7、报告基因：通常会有一两个蛋白，被用作报告基因，比如常见的copGFP（绿色荧光蛋白），Puro（嘌呤霉素），Lacz（乳糖操纵子）等等。

8、和抗性基因不同，这样的报告基因，并不是为了在大肠杆菌扩增质粒的过程中起作用的。

9、而是在质粒转入表达体系后起到作用的，基本上就是为了显示过表达或是敲减的基因是否正常运作。

10、有的报告基因会融合在蛋白中表达，有的会另外用一个独立的启动子进行表达（比如shRNA的质粒中）。

11、3.第三步，看多克隆位点：MCS（Multiple Cloning Site，也就是多克隆位点），一般图中会把多克隆位点上的酶切位点都标记出来。

12、上面的酶切位点顺序，一般都是按照5`-3`的顺序排列下来的，需要注意的是这样几点。

13、第一点是要注意，酶切位点边标注了*的一般是指并不仅仅存在一个位点，也就不能用来作为构建质粒的酶切位点。

14、第二点需要注意的是，有的酶切位点，在序列中只有一个，但它上面也会标注一个*或者（dam），这说明可能这个酶切位点会有CpG岛的甲基化修饰[常见的是XbaI，TCTAG(6m)A中的TC无法切开]，一般也是不能用的。

15、但是非要用这个酶切位点的话，就需要用非甲基化的感受态细胞，如JM109或者JM110。

16、4.第四步，看多克隆位点的序列：末端如果有差异的话，可以把基因的ATG（甲硫氨酸）的5`末端替换1-2个碱基（变成GTG或者GCG这样），从第二个氨基酸序列开始完全一致即可。

17、而配合扩增和酶切的话，插入片段是允许有3`末端的冗余。

18、为了可以应付3`末端的冗余碱基，在多克隆位点序列后，会有译码的终止TAA密码，即使插入的片段使得3`末端产生了移码突变，照样能使表达的蛋白正常终止掉（在酵母双杂的AD质粒中，由于插入的是随机cDNA，所以AD的载体上会常见这样的结构）。

19、扩展资料分类1.根据质粒能否通过细菌的接合作用，可分为接合性质粒和非接合性质粒。

20、接合性质粒带有与接合传递有关的基因。

21、非接合质粒在一定条件下通过与其共存的接合质粒的诱动或转导而传递。

22、2.根据质粒在细菌内的复制类型可分为两类：严紧控制型和松弛控制型。

23、严紧控制复制型质粒的复制酶系与染色体DNA复制共用，只能在细胞周期的一定阶段进行复制，当细胞染色体停止复制时，质粒也就不再复制。

24、松弛控制复制型的质粒的复制酶系不受染色体DNA复制酶系的影响，在整个细胞生长周期中随时都可以复制，在染色体复制已经停止时质粒仍能继续复制。

25、3.根据质粒的不相容性，可分为不相容性和相容性。

26、不相容性指结构相似、密切相关的质粒不能稳定地共存于同一宿主细菌内的现象，反之为相容性。

27、常用于流行病学的调查。

28、参考资料：百度百科-质粒。

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